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Title: Aislamiento y caracterización de w-aminotransferasa a partir de Fusarium oxysporum
Authors: CAMPA RAMOS, RITA MARIA
MARTIN GARCIA, ABRAHAM ROGELIO; 41170
Issue Date: 10-Aug-2017
Publisher: CAMPA RAMOS, RITA MARIA
Abstract: La producción de compuestos quirales e intermediarios quirales, en las últimas décadas ha incrementado considerablemente por su demanda en diversas industrias como la agroquímica, la de fragancias y la farmacéutica; tanto los producidos por rutas sintéticas tradicionales como los producidos utilizando tecnología enzimática. Es por esto por lo que el estudio y la identificación de enzimas que ayudan a sintetizar compuestos con actividad óptica tiene una repercusión práctica y científica; entre estas enzimas están las ω-Aminotransferasas; las cuales son utilizadas para la síntesis de aminas quirales. En esta investigación se probaron levaduras Saccharomyces cerevisiae pero no fueron estereoespecíficas por lo que se utilizaron algunos mohos siendo el Fusarium oxysporum el adecuado, con el cual fue detectada una aminotransferasa que mostró estereoespecificidad por (R)-(-)-(α)-Metilbencilamina (R-MBA) a una temperatura de 28°C y un pH de 6.29; a estas condiciones presento una velocidad de producción de acetofenona de 0.288μmol/(L*min), utilizando 1.2 gramos de células de Fusarium oxysporum; estas células fueron rotas por contacto con Nitrógeno líquido. La identificación de la ω-Aminotransferasas con estereoespecifidad R fue realizada en un volumen de reacción de 50 mL, utilizando una mezcla de reacción de composición 15 mM de (R)-(-)-(α)-Metilbencilamina, 100 Mm piruvato de sodio (PS) y 1 mM piridoxal-5-fosfato; siendo este último el cofactor de la enzima, la temperatura adecuada fue de 32.5°C y un pH de 6.28, presentando una velocidad de 0.301μM/min. En cuanto a la determinación de las afinidades por los sustratos y productos no se mostraron inhibiciones ni por reactivos ni por productos, donde observo que siguió una cinética de Michaelis-Menten, donde la Vmax para PS fue de 0.189μM/min con una Km de 2.093mM y para R-MBA fue de 0.216μM/min con una Km de 2.15mM, para los productos se obtuvo una Vmax de 3.79μM/min para la acetona con una Km de 0.02mM y para la alanina una Vmax de 3.81μM/min con una Km de 0.046mM por lo que se mostraron afinidades tanto para sustratos como para productos, donde la mayor afinidad la mostro la acetofenona, así mismo su número de recambio fue alto por qué no hubo inhibición.
Description: Tesis de maestría en ciencias de la ingeniería: ingeniería química
URI: http://www.repositorioinstitucional.uson.mx/handle/unison/3362
ISBN: 1736625
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