Clonación del ADNc que codifica para la enzima Antocianidin Sintasa (ANS) de mango (Mangifera indica L.)

Abstract

La antocianidin sintasa (ANS) es una enzima que participa en el metabolismo secundario de las plantas en la ruta de los fenilpropanoides, hidroxila el carbono 3 de las leucoantocianidinas para producir las antocianidinas, compuestos precursores de los pigmentos que dan color a las plantas. El objetivo de esta investigación fue clonar la región codificante para la antocianidin sintasa de mango (Mangifera indica L). Se obtuvo la secuencia nucleotídica de una clona parcial del extremo 3’ de la antocianidin sintasa a partir de un banco de genes construido de mesocarpio de mango. Para completar la región codificante (extremo 5’) se utilizó la reacción en cadena de la polimerasa y como molde una mezcla de ADN complementario de mesorcapio, epicarpio, hojas y embrión. Se obtuvo un fragmento de 800 pares de bases y se clonó en el vector pCR2.1 para ser secuenciado y al analizarse mediante el algoritmo BLAST, se identificó como antocianidin sintasa. Posteriormente, se realizó un ensamble de ambos fragmentos resultando un marco de lectura continuo de 1056 pares de bases que codifican para una antocianidin sintasa de 351 aminoácidos, la cual posee dos dominios característicos. Un dominio es de la familia 2 oxoglutarato dioxigenasa dependiente de hierro II y otro de la familia Diox-n. La secuencia aminoacídica se comparó contra la antocianidin sintasa de Vitis vinifera, Citrus sinensis, Dimocarpus longan, Theobroma cacao y Garcinia mangostana, presentando una alta identidad entre ellas. Además, se realizó una modelación tridemensional de la antocianidin sintasa de mango por medio del programa MOE, donde se observa una alta similitud con las estructuras de las enzimas de Arabidopsis thaliana y Spinacia oleracea. Por lo tanto, la región codificante de la antocianidin sintasa de mango es muy parecida en tamaño y secuencia nucleotídica a la de otras plantas, así como su secuencia aminoacídica y estructura modelada.