Purificación de ficocianina estraída de la microalga roja: (Rhodosorus marinus)

Abstract

En este trabajo se describe la extracción y purificación de la ficocianina obtenida de la microalga roja Rhodosorus marinus. El proceso de purificación para la ficocianina consistió en una serie de pasos de extracción por fragmentación celular manual y sonicación de las células de R. marinus. La ficocianina fue extraída por precipitación doble con sulfato de amonio (40 y 60%) y una posterior desalación por cromatografía en gel de Sephadex G-25, finalmente la purificación de la ficocianina del resto de las ficobiliproteínas se realizó por cromatografía de intercambio aniónico empleando una columna Q-Sepharosa con un gradiente de elución con buffer de fosfato (0.010 M de Na2HPO4.7H2O pH 7.0) de diferente fuerza iónica (0.1 M, 0.25 M y 0.5 M de NaCl) y posteriormente se aplicó una Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC), para lograr un alto grado de pureza . La pureza de ficocianina fue estimada por caracterización espectroscópica UV visible y electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE). La pureza de la ficocianina obtenida a través de los procesos de extracción y purificación de ficocianina fue calculada. El grado más alto de pureza obtenido para la ficocianina fue de 4.6, con un pico de absorbancia máximo a 615 nm, característico de dicha proteína. En SDS-PAGE, la ficocianina purificada mostró dos bandas electroforéticas características de las subunidades α y β, con pesos moleculares de 18.4 y 20.6 kDa, respectivamente. Los resultados anteriores muestran que se puede obtener Ficocianina con un alto grado de pureza a partir de la microalga Rhodosorus marinus, a través de la metodología empleada en este trabajo, lo cual se establece como una opción viable para la obtención de la proteína pura.