Sobreexpresión, purificación y caracterización parcial de la hemosilina dependiente de lecitina (HDL) de la bacteria Vibrio parahaemolyticus

Abstract

La camaronicultura, al ser una actividad productiva de gran importancia, tanto a nivel nacional como internacional, genera grandes responsabilidades en cuanto a las precauciones y medidas de sanidad que deben aplicarse para mantener un control de calidad. Las enfermedades en granjas de cultivo son un obstáculo en la búsqueda de lo anteriormente mencionado, debido a que ocasionan diversos impactos tales como la disminución de la calidad del producto y en muchos casos, una amplia tasa de mortalidad de los ejemplares. Los estudios realizados en el laboratorio son un buen inicio con respecto a la búsqueda de respuestas ante esta problemática global ya que conlleva el desarrollo de nuevas estrategias que en el futuro puedan evitar diversas enfermedades y recuperar la calidad del producto o incluso incrementarla. Al conocer los factores que ocasionan los daños, tanto a nivel biológico como bioquímico, se facilita el uso de las metodologías empleadas para encontrar las causas y una posterior solución a la problemática. En el presente trabajo se realizó la sobreexpresión de la enzima hemolisina dependiente de lecitina (HDL) recombinante de Vibrio parahaemolyticus, para realizar una caracterización parcial de la misma. La HDL se sobreexpresó en forma de cuerpos de inclusión en E. coli. La proteína fue replegada por medio de diálisis del agente desnaturalizante (urea) y purificada por cromatografía de afinidad a metales. Además, presentó actividad de fosfolipasa al utilizar como sustrato la fosfatidilcolina y se calculó el peso molecular de la proteína por medio de cromatografía de exclusión molecular. Estos estudios servirán como precedente para realizar una caracterización completa de la enzima, dado que se tienen escasas investigaciones al respecto. Este trabajo establece las bases para determinar el papel de la HDL durante la infección de V. parahemolyticus en el camarón blanco (Litopenaeus vannamei).