Evaluación de procedimientos de tinción para el análisis de proteínas por electroforesis (SDS-PAGE)

Abstract

La electroforesis en geles de poliacrilamida en presencia de dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) fue descrita por primera vez por Laemmli en 1970 y hasta ahora son mínimas las modificaciones realizadas a la metodología original. Sin embargo, el consumo de tiempo excesivo para el revelado de los geles la hace poco atractiva para que se pueda aplicar en los análisis de rutina de un laboratorio clínico. El objetivo de este trabajo fue la evaluación de distintos procedimientos de tinción para el revelado de geles en el análisis de proteínas del suero humano por electroforesis SDS-PAGE. Se utilizaron los colorantes Violeta de Genciana, Azure A y Azul Indigo 23, con el fin de investigar la capacidad de resolución en el revelado de geles usando Como colorante control al Azul de COOMASSIE. Se estandarizó la técnica de SDS-PAGE para el análisis de muestras de suero humano logrando reducir hasta un 25% el tiempo total. El violeta de genciana presentó mayor sensibilidad para la tinción de proteínas en los geles de SDS-PAGE. El método fue validado con pruebas de control de calidad analítica, resultando una excelente linealidad (R2 > 0.995), con un límite de detección similar al del Azul de COOMASSIE (< 1.0 g) y excelente reproducibilidad (m= 1.045). El análisis de muestras clínicas se validó con suero fresco humano presentando una correlación aceptable (0.971) para la albumina que fue la proteína que se utilizó como estándar de comparación en todo este estudio. Los resultados de este trabajo demuestran que es posible utilizar colorantes comunes disponibles en cualquier laboratorio de análisis.