Generación y aplicación de sensores biológicos para la identificación de epítopes inmunodominantes de proteínas de Giardia Iamblia que estimulan una respuesta inmunológica

Abstract

Tesis de doctorado en ciencias materiales. G. lamblia es el agente causal de la giardiasis en humanos y varias especies animales. Las manifestaciones clínicas de la giardiasis se caracterizan por infecciones sintomáticas con diarrea, dolor abdominal, flatulencias, síndrome de malabsorción de nutrimentos. Adicionalmente, en ciertos individuos la infección puede ser asintomática. La respuesta inmunológica juega un papel muy importante como un sensor biológico (por ejemplo: anticuerpos, CMH clase II) en la erradicación de la giardiasis. El conocimiento actual acerca de las moléculas de G. lamblia que inducen una respuesta inmune protectora es muy limitado, por lo cual el objetivo principal de este trabajo fue el identificar proteínas inmunodominantes de proteínas de G. lamblia mediante la utilización de sensores biológicos (anticuerpo monoclonal, molécula principal de histocompatibilidad clase II) en un modelo murino de infección. Previamente en nuestro laboratorio se generaron hibridomas de células T y B específicos para proteínas de G. lamblia (cepa GS/M-83-H7), mediante la fusión de células de timoma (hibridomas de céluals T) o de mieloma (hibridomas de células B) con células de ratones inmunizados con extractos proteicos de G. lamblia (hibridomas de células T), o células de ratones infectados con trofozoítos de G. lamblia (hibridomas de células B). Se generaron 7 hibridomas de células T específicos para proteínas de G. lamblia. Se identificaron algunas proteínas de G. lamblia potencialmente responsables de la inducción de una respuesta inmune celular. Los anticuerpos monoclonales (hibridomas de células B) generados reconocieron a una banda proteica de G. lamblia de masa molecular relativa de ± 71 kDa (proteína 5G8). Esta proteína fue también reconocida por sueros de ratones infectados y re-infectados. La proteína 5G8 se expresó en la superficie, así como en el interior, de trofozoítos. Adicionalmente, los anticuerpos específicos para esta proteína indujeron fuertemente la aglutinación (> 70-90 %) de trofozoítos de G. lamblia in vitro. En resumen, este trabajo describe la identificación y caracterización parcial de proteínas Inmunogénicas de G. lamblia. Se generaron los primeros hibridomas de células T específicos para proteínas de G. lamblia descritos, así como, anticuerpos monoclonales específicos para la proteína inmunogénica 5G8 de G. lamblia que induce una respuesta inmunológica de tipo humoral, los cuales serán útiles para la caracterización bioquímica e inmunológica para este antígeno del parásito.