Preservación de Streptococcus pyogenes mediante liofilización utilizando leche descremada al 1% como agente crioprotector

Abstract

La liofilización está considerada como el método más adecuado para la preservación de microorganismos. La técnica involucra el congelamiento de un cultivo seguido por un secado a bajo vacío, lo cual resulta en la sublimación de agua de la suspensión celular. La ventaja es que la mayoría de los organismos sobreviven al secado y el cultivo es fácilmente mantenido aún a temperatura ambiente sin pérdida significativa de viabilidad. El agente protector empleado en la liofilización es un factor importante en el proceso. Entre los agentes recomendados están la leche descremada en concentraciones del 10% al 20%, ya que evita la lesión celular mediante la estabilización de los constituyentes de la membrana celular y crea una estructura porosa en el producto liofilizado que hace más fácil la rehidratación, además de contener proteínas que proporcionan una capa protectora para las células. En este trabajo se liofilizaron cepas de S.pyogenes obtenidas de aislamientos clínicos del Hospital Dr. Ignacio Chávez, como método de conservación a largo plazo. Se tomaron 250µL de células bacterianas cultivadas, suspendidas homogéneamente en un medio general adicionado con 1% de leche descremada. Se refrigeraron a 4°C durante 30 minutos, y se congelaron a -80°C de 24-48 horas, para después llevar a cabo el proceso de liofilización por 24 horas, a una presión de al menos 0.250mBar y a una temperatura de -53°C. Los viales que contenían el liófilo se sellaron con parafilm y fueron almacenados a temperatura ambiente. Para determinar la viabilidad post liofilización, se añadió 1mL de agua peptonada estéril al vial que contenía la muestra liofilizada y se homogeneizó. Se realizó la técnica de cuenta de bacterias por placa vaciada de acuerdo a lo establecido en la Norma Oficial Mexicana NOM-092-SSA1-1994. Las características propias de las cepas estudiadas se mantuvieron estables y sin contaminación evidente. Las cepas en leche descremada al 1%, conservaron la viabilidad de 10^6 UFC/mL, demostrando así que dicha concentración del agente crioprotector en la liofilización fue efectiva para la conservación, siendo un método de gran utilidad en el trabajo de las colecciones de cultivos que se emplean en el laboratorio de microbiología.