Estudio comparativo de la estabilidad térmica de tripsina III recombinante de sardina Monterrey y tripsina bovina

Abstract

La tripsina (EC 3.4.21.4) es una de las enzimas digestivas más importantes en muchos vertebrados. Su función es hidrolizar proteínas y péptidos en el lado carboxilo de los aminoácidos básicos Arg y Lys y su participación es fundamental en procesos biológicos de digestión. El estudio de tripsinas de peces que habitan en aguas frías se ha incrementado, debido a que para contrarrestar el efecto de las bajas temperaturas sus enzimas poseen características de adaptación al frío, tales como una alta eficiencia catalítica y una baja estabilidad térmica; particularidades que pueden ser aprovechadas para aplicaciones industriales y biotecnológicas. La adaptación al frío sugerida para la tripsina de sardina Monterrey hace que sus enzimas digestivas sean únicas, por ello se utilizo como modelo de estudio para la isoforma de tripsina III recombinante de sardina Monterrey. En el presente trabajo, se purificó la enzima por medio de una serie de pasos cromatográficos. Se evaluaron los perfiles de actividad residual contra temperatura y se determinó la estabilidad térmica por las técnicas de calorimetría de barrido diferencial y espectroscopía de dicroísmo circular. Como resultado, se logró obtener una tripsina III recombinante de sardina Monterrey de 24 kDa, cuyos parámetros termodinámicos mostraron una Tiempo de vida media de 47 min a 50°C, Tm de 60 °C y 58.4 °C por diversas técnicas, y AH=41.65 kcal/mol. Estos valores indicaron que la sardina Monterrey presenta características d una enzima adaptada al frio y muestra una mayor estabilidad térmica en relación a su estructura global que su contraparte bovina y sugiere menor estabilidad en regiones relacionadas con su sitio activo.