Silenciamiento de la adn polimerasa del herpesvirus de ostreidos 1 (OsHV-1) en el ostión del pacífico Crassostrea gigas

Abstract

La producción del ostión Pacífico Crassostrea gigas ha sufrido pérdidas considerables en los últimos años, debido a mortalidades causadas por la infección con el Herpesvirus de Ostreidos 1 (OsHV-1). El ARN de interferencia (ARNi) es una técnica molecular que ha demostrado ser una alternativa contra las infecciones virales. Dentro de los ARNi, están los small hairpin ARN u horquillas de ARN (shRNA), que ligados a vectores de expresión, permiten un efecto de silenciamiento de genes más prolongado. Por otro lado, las ADN polimerasas son las enzimas encargadas de la replicación del ADN viral en este caso, resultando ser un blanco ideal para el silenciamiento del gen y el control de la infección por OsHV-1. Hasta donde conocemos, no hay estudios realizados sobre el silenciamiento de la ADN polimerasa del Herpesvirus de ostreidos 1 en C. Gigas; por lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue silenciar in vivo el gen de la ADN polimerasa del OsHV-1 en C. gigas utilizando un shRNA. La metodología consistió en la síntesis y purificación de un shRNA específico dirigido a la ADN polimerasa viral, el cual se inyectó en juveniles de C. gigas infectados con el OsHV-1 y se tomaron muestras a las 0, 12, 48, 72, 108 y 156 horas post infección (hpi). El silenciamiento de la ADN polimerasa viral disminuyó la mortalidad en ostiones infectados e inyectados con el shRNA. Mediante qPCR se detectó una disminución del número de copias virales a las últimas horas de infección (48, 72 y 108) para el tratamiento de organismos infectados + shRNA. Mediante la técnica de tinción hematoxilina-eosina se observaron daños severos en las branquias de los organismos infectados y por el ensayo de túnel se obtuvo un decremento de las células hemocitarias con apoptosis a las 72 hpi (19%) en las branquias de organismos infectados + shRNA, comparado con las 72 hpi (31%) de organismos infectados. También por PCR en tiempo real se detectó una disminución del número de copias virales a las 72 y 108 hpi en el tratamiento de organismos infectados e inyectados con shRNA, comparado con el tratamiento de ostiones infectados. Este es el primer reporte de silenciamiento utilizando shRNA clonado en un vector de expresión dirigido a la ADN polimerasa del OsHV-1. Los resultados sugieren que el gen de la ADN polimerasa se silenció, disminuyendo la replicación del ADN viral; lo anterior sugiere que esta podría ser una estrategia prometedora para el control de la infección en el ostión del pacífico.