Estudio de infiltración tangencial de lisados mecánicos de E. Coli para la recuperación de plásmidos

Abstract

La efectividad de las vacunas y la inmunización en la prevención de las enfermedades infecciosas es uno de los grandes avances de la medicina. En la actualidad, el acceso a la tecnología en el área de la genómica ha hecho posible acelerar el desarrollo de nuevos modelos de vacunas con características mejoradas en aspectos fundamentales, como la inmunogenicidad y la seguridad. Las vacunas de ADN plasmídico, (ADNp), es una metodología relativamente simple que ha abierto una nueva era en la inmunología, con un alto potencial como vacunas profilácticas y terapéuticas. El gran potencial de las vacunas de ADN reside en su gran versatilidad, ya que pueden diseñarse plásmidos de acuerdo con el tipo de enfermedad o patógeno contra el cual se quiera inducir una respuesta inmunitaria. Los plásmidos son moléculas extracromosómicas de ADN de cadena cerrada, de doble hélice que se caracterizan por que se pueden replicar de manera independiente del ADN genómico. Por medio del ADNp se puede aislar y estudiar genes, así como transferir material genético. También actualmente se utiliza el ADNp como plataforma en la síntesis de ARNm en la producción de vacunas contra Covid-19. Los plásmidos se obtienen mediante cultivo celular de microorganismos preparados genéticamente para hospedarlos, como Escherichia coli. La producción de ADN plasmídico sigue las etapas: fermentación, recuperación primaria, recuperación intermedia y purificación. Al realizar la lisis alcalina, se producen flóculos y precipitados, que es necesario eliminar para obtener un lisado clarificado. Tradicionalmente esta clarificación se realiza por centrifugación, pero se ha encontrado que hay perdida de ADNp. Recientemente se han estado utilizado métodos mecánicos de ruptura celular para obtener un lisado sin la utilización de agentes químicos. Es pertinente estudiar la clarificación de un lisado mecánico para eliminar los restos celulares, por lo que en este trabajo se propone evaluar la etapa de clarificación de lisados mecánicos por medio tecnología de membranas para la recuperación de plásmido, así como estudiar la clarificación de lisados mecánicos de E. coli por medio de ultrafiltración tangencial para la recuperación de plásmido.