Respuesta del camarón blanco del pacífico, penaeus vannamei (Boone, 1931), al desafío del virus de la cabeza amarilla (YHV) a diferentes salinidades

Abstract

Tesis de maestría en ciencias en acuacultura. En el presente estudio se evaluó la respuesta del camarón blanco, Penaeus vannamei, al desafío con el virus de la cabeza amarilla (YHV) a salinidades de 5, 15, 25 y 40 psu bajo condiciones de laboratorio. En el experimento se analizaron por histología, hibridación in situ y RT-PCR un total de 100 camarones provenientes de cultivo, con un peso promedio de 18.28 ± 2.04 g. Para ajustar las salinidades, los organismos se aclimataron a razón de 2 psu/hr durante una semana previa al desafío. Se les proporcionó alimento comercial a un 5 % de la biomasa total con aireación constante, a temperatura de 28 °C. La densidad manejada fue de 25 org/m2, en acuarios de 60L en tres réplicas por tratamiento, con sus controles positivo y negativo. Se aplicó una inyección de inóculo de extracto de tejido infectado de P. vannamei con YHV así como un extracto libre del virus a cinco camarones por acuario. Se inyectaron los camarones experimentales con una dosis de 180 µ l del extracto, entre el segundo y tercer segmento abdominal sobre la superficie ventral; los camarones de los controles negativos fueron inyectados solo con solución salina al 2% para igualar la condición de estrés. Después de la infección, se colectaron tres organismos cada 24 h por tratamiento durante cinco días. Los camarones de los controles positivos fueron muestreados solo al observarse moribundos. Mediante análisis histológico, se observaron daños severos en branquias y órgano linfoide con picnosis y carreorexis celular. De igual forma, se observaron daños severos a través de hibridación in situ, el cual mostró reacción positiva a la sonda molecular en órgano linfoide y branquias con evidentes signos clínicos específicos del YHV. Para el análisis por RT- PCR se empleó el juego de reactivos (IQ2000) para confirmar la existencia del virus. En la electroforesis se observó en gel de agarosa al 2.0 %, una banda positiva de 277 pb teñida con Bromuro de Etidio. De acuerdo con los resultados con el curso de la mortalidad debida solamente al virus y a los resultados de RT-PCR de los organismos analizados por espacio de 24 horas, la mayor virulencia se expresó en los camarones sometidos a salinidades extremas de 5 y 40 psu donde murieron en 4.96 y 5.96 días con un porcentaje de severidad de infección del 40% y 27%, valorado mediante la escala de infección de IQ2000. Además, se demostró un mayor soporte a la infección experimental en salinidades próximas o dentro de las condiciones isosmóticas idóneas para P. vannamei de 15 y 25 psu, ya que lo organismos vivieron mayor tiempo, 15 y 22.6 días con infecciones bajas del 13% y 0% respectivamente. Se concluye que la salinidad es un factor determinante en el disparo de la virulencia de YHV, por lo que los sistemas de salinidades extremas pueden estar sujetos al riesgo de mayores cuadros de ataque por el virus de la cabeza amarilla.En el presente estudio se evaluó la respuesta del camarón blanco, Penaeus vannamei, al desafío con el virus de la cabeza amarilla (YHV) a salinidades de 5, 15, 25 y 40 psu bajo condiciones de laboratorio. En el experimento se analizaron por histología, hibridación in situ y RT-PCR un total de 100 camarones provenientes de cultivo, con un peso promedio de 18.28 ± 2.04 g. Para ajustar las salinidades, los organismos se aclimataron a razón de 2 psu/hr durante una semana previa al desafío. Se les proporcionó alimento comercial a un5 % de la biomasa total con aireación constante, a temperatura de 28 °C. La densidad manejada fue de 25 org/m2, en acuarios de 60L en tres réplicas por tratamiento, con sus controles positivo y negativo. Se aplicó una inyección de inóculo de extracto de tejido infectado de P. vannamei con YHV así como un extracto libre del virus a cinco camarones por acuario. Se inyectaron los camarones experimentales con una dosis de 180µ l del extracto, entre el segundo y tercer segmento abdominal sobre la superficie ventral;los camarones de los controles negativos fueron inyectados solo con solución salina al2% para igualar la condición de estrés. Después de la infección, se colectaron tres organismos cada 24 h por tratamiento durante cinco días. Los camarones de los controles positivos fueron muestreados solo al observarse moribundos. Mediante análisis histológico, se observaron daños severos en branquias y órgano linfoide con picnosis y carreorexis celular. De igual forma, se observaron daños severos a través de hibridación in situ, el cual mostró reacción positiva a la sonda molecular en órgano linfoide y branquias con evidentes signos clínicos específicos del YHV. Para el análisis por RT- PCR se empleó el juego de reactivos (IQ2000) para confirmar la existencia del virus. En la electroforesis se observó en gel de agarosa al 2.0 %, una banda positiva de 277 pb teñida con Bromuro de Etidio. De acuerdo con los resultados con el curso de la mortalidad debida solamente al virus y a los resultados de RT-PCR de los organismos analizados por espacio de 24 horas, la mayor virulencia se expresó en los camarones sometidos a salinidades extremas de 5 y 40 psu donde murieron en 4.96 y 5.96 días con un porcentaje de severidad de infección del 40% y 27%, valorado mediante la escala de infección de IQ2000. Además, se demostró un mayor soporte a la infección experimental en salinidades próximas o dentro de las condiciones isosmóticas idóneas para P. vannamei de 15 y 25 psu, ya que lo organismos vivieron mayor tiempo, 15 y 22.6 días con infecciones bajas del 13% y 0% respectivamente. Se concluye que la salinidad es un factor determinante en el disparo de la virulencia de YHV, por lo que los sistemas de salinidades extremas pueden estar sujetos al riesgo de mayores cuadros de ataque por el virus de la cabeza amarilla.