La ciclofilina D del camarón blanco (Litopenaeus vannamei) : caracterización del transcrito e identificación de la proteina

Abstract

La ciclofilina D es la isoforma mitocondrial de la familia de las ciclofilinas (EC 5.2.1.8), su actividad enzimática consiste en catalizar la interconversión de los isómeros cis/trans en los enlaces peptídicos que contienen prolina. Es ampliamente aceptado que la función biológica de esta enzima es permitir el correcto plegamiento de proteínas recién importadas a la matriz mitocondrial, tal y como hacen otras ciclofilinas en otros compartimientos celulares. Sin embargo, la ciclofilina D también participa como un elemento regulador importante del poro de transición de la permeabilidad mitocondrial, el cual se ha asociado a procesos como la lesión por isquemia-reperfusión, la homeostasis del calcio intracelular, la respuesta celular al estrés oxidativo, hipertensión, enfermedad de Alzheimer, entre otros. A pesar de que existe mucha información disponible acerca de la ciclofilina D, la mayoría de ella proviene de estudios realizados en mamíferos. La información acerca de esta proteína en crustáceos es aún escasa. Por lo anterior, este estudio pretende aportar conocimiento sobre esta enzima por primera vez reportada en un crustáceo, el camarón blanco Litopenaeus vannamei. Se caracterizó la secuencia de ADNc correspondiente al transcrito de la ciclofilina D del camarón, el cual posee una longitud de de 774 pb, tiene un péptido señal dirigido a la mitocondria y se expresa de manera ubicua en todos los tejidos. La proteína deducida completa de este transcrito cuenta con 196 aminoácidos, una masa molecular estimada de 18 kDa y posee todos los dominios y características de un miembro de la familia de las ciclofilinas. Además, esta proteína del camarón tiene una identidad de más del 70% con secuencias pertenecientes a la ciclofilina D de otros organismos, lo cual sugiere que las ciclofilinas mitocondriales cumplen un papel de suma importancia en estas especies. Por otro lado, se realizó un ensayo de inmunodetección de esta proteína en extractos proteicos mitocondriales del camarón mediante el uso de anticuerpos específicos contra ciclofilina D humana, en el cual se compararon muestras control con muestras sometidas a tratamientos de 12 h de hipoxia seguidas de 12 h de reoxigenación. El ensayo comparativo de inmunodetección no arrojó diferencias apreciables al comparar muestras control con muestras correspondientes a tratamientos con 6 h de hipoxia, 12 h de hipoxia, 6 h de reoxigenación y 12 h de reoxigenación. Sin embargo, estos resultados no permiten descartar una posible función de esta proteína en procesos patológicos asociados a estrés mitocondrial, por lo que son necesarios más estudios para confirmar la función reguladora de la enzima.