Actividad hemolítica y termoestabilidad de hemolisina dependiente de lecitina de Vibrio parahaemolyticus

Abstract

La camaronicultura es una de las actividades de mayor importancia en términos de volumen y empleos generados. Mas, sin embargo, en los últimos años la producción ha decaído debido principalmente a las epidemias causadas por diversos patógenos, principalmente y más reciente Vibrio parahaemolyticus. Por tanto, es pertinente estudiar su mecanismo de patogenicidad, el cual se ha reportado puede estar mediado por proteínas del tipo hemolisinas que pueden ser factores de virulencia., Por lo anterior, el objetivo de esta investigación es determinar la actividad hemolítica y termoestabilidad de la hemolisina dependiente de lecitina (HDL) de V. parahaemolyticus. Para cumplir el objetivo se realizó la sobreexpresión de la HDL recombinante de V. parahaemolyticus en E. coli. La proteína fue replegada por medio de diálisis utilizando el agente desnaturalizante (urea). Además, mostro tener actividad fosfolipasa mediante un ensayo semi-cuantitativo en placa utilizando fosfatidilcolina como sustrato. Asimismo, presentó actividad hemolítica utilizando hemocitos de camarón teñidos con rosa de bengala al 3 %. Con lo que respecta a su termoestabilidad, la HDL mostró mayor actividad enzimática a una temperatura de 40 °C y demostró ser una hemolisina sensible a temperaturas superiores a 60 °C durante 15 minutos, considerándose una hemolisina termolábil. La HDL manifestó ser estable en un rango de temperatura de 10 °C a 40 °C. De igual manera demostró ser estable al ser almacenada por cinco semanas a 4 °C y –20 °C siendo esta última su temperatura óptima de almacenamiento. De acuerdo con los resultados presentados, la LDH de V parahaemolyticus es una enzima termolábil y es capaz de lisar hemocitos de camarón por lo que podrías estar implicada en el mecanismo de infección de esta bacteria en camarón.