Extracción y cuantificación de hidrocarburos cuticulares de Triatoma longipennis, por cromatografía en columna y de gases

Abstract

Triatoma longipennis, es uno de los insectos que participa como vector de la enfermedad denominada “Enfermedad de Chagas”, la cual es causada por un parásito flagelado llamado Trypanosoma cruzi, el cual es desalojado en el huésped por las heces del insecto del género Triatoma después de alimentarse de sangre por una picadura indolora. Esta enfermedad se distribuye por toda América, desde el sur de los Estados Unidos hasta Argentina, mayormente en áreas rurales de mayor pobreza en Centro y Sudamérica, incluyendo algunos de los estados de México, con una fuerte incidencia en nuestro país. Por tal motivo, es importante desarrollar metodologías que ayuden a identificar los principales vectores que se encuentran dentro de nuestra región, y que pueden ser indicadores de riesgo para la proliferación de dicha enfermedad. En este trabajo se identificaron y cuantificaron los hidrocarburos cuticulares (HC) de las alas primarias y secundarias de T. longipennis por medio de cromatografía. Los insectos fueron sometidos a un choque térmico (-4°C/15min) para su sacrificio, para posteriormente quitarle las alas y realizar la extracción de compuestos grasos e hidrocarburos con 1.5 mL de hexano, bajo condiciones ambientales. Los HC fueron purificados de la muestra por medio de cromatografía en columna la cual fue empacada con 1.5 gr de sílica gel (70-230 mesh), para ser previamente eluidos con 2.0 mL de hexano HPLC. Las muestras eluidas fueron concentradas evaporando el solvente a sequedad con una corriente de nitrógeno y resuspendidas en 5 μL de hexano, la cual fue inyectada al cromatógrafo de gases. La identificación y cuantificación de los hidrocarburos cuticulares se realizó con estándares certificados (ALDRICH), los cuales van desde el C19 (nonadecano) hasta el C40 (tetracontano). Las muestras se inyectaron (300 °C) a un equipo de cromatografía de gases (VARIAN cp-3800), provisto con una columna Factor Four (30 m x 0.32 mm x 0.25 μm) y los componentes fueron separados por un programa de temperatura (iniciando a 50 °C por 1 min y después fue aumentando gradualmente 15 °C/min hasta 300 °C, manteniéndose a esa temperatura por 10 min). La detección se realizó por medio de ionización de flama (FID, 300 °C), utilizando helio de alta pureza como gas acarreador. Se obtuvieron los cromatogramas característicos de Triatoma longipennis, con excelente resolución de los picos, los cuales fueron identificados con el análisis del Indice de Kovats (IK) encontrándose un total de 40 HC (14 lineales y 26 ramificados) en machos, y 38 HC (14 lineales y 24 ramificados) en hembras. El HC27 mostró mayor diferencia significativa entre ambos sexos (5.74 % en machos y 11.97 % en hembras), lo cual crea la característica en las hembras de formar una campana de gauss, en el cromatograma con los hidrocarburos característicos lineales. La mayoría de los HC encontrados en machos fueron similares a las hembras, excepto por 2 hidrocarburos ramificados los cuales no se encontraron en hembras, con longitud de cadena de 24 carbonos (IK: 2467, 2472). Los hidrocarburos característicos, que representan los marcadores taxonómicos de la especie Triatoma longipennis son los hidrocarburos lineales, HC23 (1.78%), HC25 (5.31%), HC27 (8.86%), HC29 (16.30%), HC31 (13.70%), HC33 (5.03%). El HC que presentó mayor concentración fue el HC29 (17.04% en machos y 15.55% en hembras), mientras el que presentó menor concentración fue el HC23 (2.43% en machos y un 1.11% en hembras), el hidrocarburo ramificado de mayor concentración fue uno de 37 carbonos (IK: 3778). Los resultados de este trabajo demuestran o concluyen que existe un perfil característico de hidrocarburos cuticulares para la especie Triatoma longipennis, y que existe una diferencia significativa entre géneros, con lo cual nos puede ayudar a una mejor comparación entre especies y a identificar quimiotaxonómicamente este importante vector de la enfermedad de Chagas. Se concluyó que las alas del insecto contienen los mismos hidrocarburos cuticulares que el cuerpo, y son una fuente de hidrocarburos más confiable, ya que al utilizar el cuerpo se corre el riesgo de extraer hidrocarburos de la linfa. También se demostró que se pueden desarrollar o modificar técnicas de identificación que nos permitan dar un seguimiento químico a estas especies vectoriales en nuestra región.