Utilización de técnicas moleculares para la identificación y caracterización genotípica de cepas de Mycobacterium aisladas en cultivo y presentes en muestras clínicas

Abstract

En la actualidad, el diagnóstico de la tuberculosis se basa, fundamentalmente, en la observación del bacilo en muestras clínicas y en su posterior desarrollo en medios de cultivo selectivos, así como diversas pruebas fenotípicas. No obstante, lo anterior, existe un creciente interés en el desarrollo y aplicación de técnicas más sensibles y específicas que reduzcan notablemente el tiempo requerido para el diagnóstico eficaz. En el presente trabajo se realizó la caracterización genotípica y polifásica de 31 cepas silvestres de micobacterias, aisladas de muestras clínicas humanas y de origen bovino, así como de tres cepas previamente tipificadas. Primeramente, se evaluó el desarrollo de las cepas en el medio de Bromocresol el cual contribuyó a la identificación de cepas de M. tuberculosis mediante el cambio del color del medio. Para la extracción de ADN, se evaluó un procedimiento con Chelex 100, mismo que permitió la obtención rápida, económica y de material de buena calidad para el subsiguiente análisis genotípico. Para la genotipificación se utilizaron las técnicas de PCR-RFLP del gen gyrB, PCR-RFLP del gen hsp65, PCR-Loci independientes y ERIC-PCR. La utilización combinada de las técnicas moleculares mencionadas y de pruebas fenotípicas realizadas previamente, permitió identificar 22 cepas de M. tuberculosis, cinco cepas de M. fortuitum, dos cepas de M. bovis, una cepa de M. massiliense y una cepa de M. flavescens. Por otro lado, se logró identificar a M. tuberculosis, a partir de la extracción directa de ADN en tres muestras clínicas y la aplicación de las técnicas de PCR-RFLP del gen gyrB, PCR-RFLP del gen hsp65, PCR-Loci independientes. Finalmente, si bien la técnica de ERIC-PCR no permitió el agrupamiento preciso de cepas por especie, si proporcionó suficiente información para la diferenciación a nivel de especie y de cepa.