Evaluación in vitro de actividad antiproliferativa de extractos proteicos de tejido estomacal de tiburón en células Hela

Abstract

El cáncer es una de las enfermedades más importantes a nivel mundial y una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en niños y adultos. Por tal razón muchas de las investigaciones en este campo están enfocadas en la búsqueda de productos que sean una opción a los tratamientos existentes. Los agentes anticancerígenos pueden derivarse del aislamiento de organismos que se encuentran en la naturaleza. Así, han sido aislados compuestos de estómago y cartílago de tiburón, los cuales exhiben actividad antiangiogénica y antitumoral (Rao y col., 1999; Higgins y col., 2000; Hao y col., 2003), por lo que en esta investigación se evaluó la actividad antiproliferativa de extractos proteicos de estómago de tiburón (Mustelus henlei). Se obtuvo un extracto crudo del estómago (isopropanol al 60 % y 1 % de ácido trifluoroacetico) del cual se separaron 3 fracciones proteicas utilizando cromatografía de filtración en gel (Sephadex G-25). El efecto antiproliferativo de las fracciones proteicas sobre la línea celular HeLa fue evaluado utilizando el ensayo de MTT. La fracción con mayor efecto antiproliferativo se sometió a una separación de proteínas utilizando Amicon Ultra-4, obteniendo una fracción de proteínas > 30 kDa y otra de proteínas < 30 kDa,. Se evaluó el efecto antiproliferativo de estas nuevas fracciones con el ensayo antes mencionado. En nuestro estudio se encontró que la fracción uno obtenida mediante cromatografía de filtración en gel, mostró un 41% de inhibición de la proliferación de la línea celular HeLa, la fracción 2 una inhibición del 36 %, y de 34 % para la fracción 3 (p< 0.05). Al ser la fracción 1 la que poseía mayor efecto inhibitorio del crecimiento celular, se sometió a la separación con Amicon Ultra-4. Después de ser tratadas las células HeLa con las fracciones obtenidas de la separación con Amicon, se observó que la fracción que contenía las proteínas < 30 kDa mostraban una inhibición de la proliferación en un 14 %, mientras que para la fracción con proteínas > 30 kDa inhibieron en un36 %. Se llevó a cabo una prueba de viabilidad celular utilizando esta última fracción y se encontró que aproximadamente el 98 % de las células se encontraban viables, por lo que probablemente el efecto inhibitorio de estas proteínas > 30 kDa lo lleva a cabo por mecanismos diferentes a la muerte celular, arrestando o retardando el ciclo celular. En conclusión, en este trabajo se obtuvo una fracción con efecto antiproliferativo hacia la línea celular HeLa. Esta Fracción ayudará de manera importante en el desarrollo de futuras investigaciones encaminadas a conocer el mecanismo por el cual ejerce el efecto inhibitorio de las células, caracterizar bioquímica de las proteínas responsables de dicha actividad, así como evaluar el uso de éstas en ensayos con otras líneas celulares.