Aislamiento y purificación de inhibidores de alpha-amilasa y su poder insecticida sobre el gorgojo pinto del frijol Zabrotes subfasciatus (Boheman)

Abstract

Las semillas de leguminosas son una fuente muy rica de proteínas dietarías en muchos países, además contienen un alto nivel de proteínas de defensa que protegen a las semillas contra predación por brúquidos. A pesar de la presencia de estas proteínas hay infestación en las cosechas por brúquidos, los cuales dañan a las semillas cuando están madurando y durante el almacenaje y en especial al frijol común Phaseolus vulgaris (L.), ya que es muy susceptible al ataque de Zabrotes subfasciatu.s (Boheman). Considerando lo antes expuesto, se realizó este trabajo, donde se aisló, purificó y se caracterizó parcialmente a los inhibidores alpha-amilasa de palo fierro 0/neya tesota (Gray), probando su efecto inhibitorio contra alpha­ amilasa del gorgojo pinto del frijol. La purificación se llevó a cabo a través de tres etapas cromatográficas: filtración en gel en Sephadex G-75, intercambio iónico en DEAE-Celulosa y recromatografía por intercambio iónico en DEAE-Celulosa. La pureza de los inhibidores alpha-amilasa, se corroboró mediante electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes y reductoras. La masa molecular nativa aparente se determinó por cromatografia de filtración en gel y fue de 41 kDa. Las masas moleculares de las subunidades de los inhibidores, se determinaron por electrofokDa y 16.2 kDa. Las subunidades de los inhibidores se electrotransfirieron a membrana de nitrocelulosa, por una reacción inmunológica se demostró la homologia de la proteína lectina con el inhibidor alpha-amilasa. Los inhibidores resultaron ser proteínas termoestables. Los inhibidores alpha-amilasa se purificaron a homogeneidad Electroforética aparente. El inhibidor alpha-amilasa de la fracción no. 1 mostró una actividad total de 9.8 UI, actividad específica de 283.72 UI/mg y un factor de purificación de 81.83. El inhibidor de la fracción no. 2 presentó una actividad total de 7.4 UI, actividad específica de 593.85 Ul/mg y un factor de purificación de 170.31 .