Desarrollo de una nanoplataforma para la encapsulación de ARNds contra el virus del síndrome de la mancha blanca basado en la cápside recombinante del Penstyldensovirus de decápodos 1.

Abstract

El crecimiento y desarrollo de la camaronicultura se ha visto frenado por diversas afecciones de causa viral, disminuyendo la producción de manera significativa en la última década. Actualmente se conocen más de 30 especies de virus que tienen la capacidad de provocar enfermedades en crustáceos marinos, de los cuales el virus del síndrome de la mancha blanca (WSSV) y el Penstyldensovirus de decápodos 1 (PstDV1) representan dos de las mayores amenazas para el cultivo y pesquería de camarón. De estos patógenos, el WSSV es considerado como uno de los patógenos que más pérdidas económicas ha generado a la industria acuícola, pudiendo llegar a provocar la muerte del 100% de los organismos cultivados en un período de 3 a 10 días posteriores a los primeros signos clínicos. El PstDV1, por su lado, no provoca eventos de mortalidades masivas, sin embargo, su infección causa una serie de deformaciones en especimenes del camarón blanco Penaeus vannamei, que conlleva finalmente a una pérdida importante de su valor comercial. Debido a las características estructurales de la cápside del PstDV1, se ha sugerido que las partículas pseudovirales (VLPs) derivadas del mismo, pudieran ser utilizadas como vehículo acarreador de biomoléculas, como ARN bicatenario (ARNds), para inmunostimular a camarones peneidos ante la infección de agentes patógenos. Mediante la administración de ARNds se puede abolir la expresión de prácticamente cualquier gen, sea este del hospedero o del patógeno, con el fin de evitar la síntesis de proteínas clave para evitar así el establecimiento de una infección fructífera. La proteína estructural VP28 es considerada como un factor clave durante el proceso infeccioso del WSSV, al contar con distintas funciones que se consideran fundamentales para que el WSSV pueda infectar una célula. Por tal motivo, el objetivo de este trabajo es desarrollar una nanoplataforma de administración de ARNds contra el gen vp28 (ARNds-vp28) encapsulado en VLPs recombinantes del PstDV1. Para lo cual, se transformaron bacterias E. coli para sobreexpresar la proteína de la cápside del PstDV1. Se ensamblaron VLPs del PstDV1 in-vitro y se purificaron por medio de ultracentrifugación con gradiente de sacarosa. Se sintetizó ARNdh-vp28 y se encapsuló en las VLPs del PstDV1, obteniendo como resultado la encapsulación de 75 ng de ARNdh-vp28. Finalmente, se comprobó que dichas partículas son capaces de proteger el ARNds encapsulado contra la acción de nucleasas.