Estudio de la clarificación de lisados de E. Coli para recuperar el plásmido pVAX1-NH36 por medio de microfiltración tangencial

Abstract

Los avances tecnológicos han permitido desarrollar productos que mejoren la calidad de vida del ser humano, como ejemplo de ello tenemos las vacunas basadas en ADN plasmídico (ADNp). Para el desarrollo de este tipo de vacunas se parte de bacterias que han sido modificadas mediante la inserción, en el ADNp, de un gen que codifica para una proteína que realiza la acción inmunizante. Para la producción y purificación del ADNp se ha establecido un bioproceso, dentro del cual encontramos cuatro etapas: a) Propagación celular: que incluye la preparación del medio, el inóculo y la fermentación; b) Recuperación primaria: ruptura celular y clarificación para remoción de desecho celulares; c) Recuperación intermedia: recuperación y concentración del producto; d) Purificación final. En la etapa de recuperación primaria se encuentra la clarificación del lisado, que a nivel laboratorio se realiza generalmente por centrifugación. Sin embargo, esta técnica emplea alta inversión en costos de energía y tiempo, además puede ser difícil de escalar. Debido a estos inconvenientes que presenta la centrifugación, se realizó la propuesta de utilizar una técnica más sencilla y barata como la microfiltración de flujo tangencial para la clarificación de lisados neutralizados conteniendo plásmido pVAX1-NH36. En la clarificación por microfiltración se inició con una filtración a vacío, seguido de un lavado de flóculos. El filtrado obtenido se alimenta a la microfiltración de flujo tangencial para obtener el lisado clarificado. Al final de la microfiltración se realizó el lavado de membrana con el fin de evaluar la presencia de plásmido retenido. Este procedimiento de clarificación se comparó con la clarificación por centrifugación. Se realizaron los balances de masa correspondientes, así como estudios por electroforesis y cromatografía de interacción hidrofóbica para evaluar la presencia de ADNp en los lisados clarificados y la remoción de sólidos en suspensión por medio de la medición de la turbidez.