Caracterización de la glicosilación terminal de la IgG sérica en pacientes con diabetes mellitus tipo 2

Abstract

La diabetes mellitus tipo 2 (DM2) es un síndrome plurimetabólico que se caracteriza por hiperglicemia crónica. Los pacientes con DM2 son susceptibles al desarrollo de infecciones recurrentes así como de complicaciones vasculares y neurológicas. Se desconocen los mecanismos responsables de la alta susceptibilidad a las infecciones de los pacientes con DM2, pero se cree que podría ser el resultado del deterioro del sistema inmune. La inmunoglobulina G, responsable de la respuesta secundaria ante un proceso infeccioso, es una proteína glicosilada cuya función óptima depende de su integridad estructural. Se ha demostrado que la alteración en los oligosacáridos de la inmunoglobulina podría afectar sus funciones efectoras, pero se desconoce si existen modificaciones en la estructura oligosacárida de la IgG de los pacientes con DM2. Por esta razón, el presente trabajo se enfocó en buscar diferencias en la glicosilación terminal de la IgG de pacientes con DM2 con respecto a la de sujetos euglicémicos pareados por sexo y edad. Se realizó un muestreo no probabilístico, por conveniencia, para conformar un grupo de nueve pacientes con DM2 y un grupo control de siete sujetos euglicémicos aparentemente sanos. La IgG de los pacientes con DM2 y los sujetos control, se purificó utilizando un esquema cromatográfico de tres etapas en secuencia, utilizando una matriz de Sefarosa 6B altamente acetilada en la primera etapa, con la que se logró aislar a las inmunoglobulinas totales del resto de las proteínas del suero; agarosa-anti IgA en la segunda etapa, con la que se separó a la IgA total del resto de las inmunoglobulinas, y en la tercera etapa se utilizó una matriz de Sefarosa-Proteína A, con el fin de aislar a la IgG del resto de las inmunoglobulinas. La elevada pureza de la IgG de la fracción de elución de la última etapa cromatográfica fue comprobada por electroforesis en condiciones desnaturalizantes y reductoras e inmunodetección. La estimación de la glicosilación terminal de la IgG pura fue realizada mediante ensayos con lectinas ligadas a una enzima (ELLA), utilizando una batería de lectinas vegetales con afinidad específica hacia uno o un grupo de carbohidratos determinados. Las lectinas utilizadas fueron: Sambucus nigra (SNA), Maackia amurensis (MAA), Canavalia ensiformis (Con A), Arachis hypogaea (PNA), Ricinus communis I (RCAI), Lens culinaris agglutinin (LCA), Erythrina cristagalli agglutinin (ECA) y Triticum vulgaris (WGA). Los resultados obtenidos con las lecturas individuales de las lectinas (SNA. MAA, PNA, RCAI, ECA, Con A, y WGA) y las relaciones entre lectinas (SNA/MAA, ECA/SNA, RCAI/SNA, WGA/ECA, WGA/RCAI y Con A/WGA) sugieren que los N-oligosacáridos de la IgG sérica están hiposialilados e hipogalactosilados en el grupo de pacientes con DM2, en comparación con el grupo control. La disminución de galactosa (incluyendo ácido siálico) deja expuesto al siguiente carbohidrato de la cadena oligosacárida (GlcNAc). Además, la lectura individual de la lectina LCA sugirió que el centro quitobiosa de la IgG de pacientes con DM2 se encuentra hipofucosilado.