Caracterización bioquímica parcial de antígenos inmunodominantes de Giardia lamblia capaces de inducir una respuesta inmune humoral en un modelo Murino

Abstract

El estudio de la respuesta inmune involucrada en la giardiasis, se ha abordado a través de la identificación y caracterización molecular de los antígenos de Giardia lamblia y en el estudio de los mecanismos de defensa contra el parásito. Sin embargo, solo relativamente pocas proteínas inmunogénicas se han caracterizado a nivel molecular. Estudios en humanos y en modelos murinos sugieren la participación importante de linfocitos T, linfocitos B ( Eckmann, 2003; Langford y cols., 2002; Rosales-Borjas y cols.,1998; Singer y col., 2000; Stäger y col., 1996) y ciertas citocinas (Biez, y cols., 2003; Venkatesan y cols., 1996; Zhou y cols., 2003; Zhou y cols. 2007) en el aclaramiento de la infección. Recientemente en nuestro laboratorio se identificaron una serie de bandas proteicas mediante SDS-PAGE, con capacidad de inducir una respuesta de anticuerpos IgA e IgG específicos hacia G. lamblia en ratones C3H/HeJ. En base a estos resultados y con el objetivo de profundizar más en el conocimiento de las proteínas inmunogénicas del parásito, se utilizó electroforesis en doble dimensión (2-DE) y análsis por espectrometría de masas. Los resultados de este estudio mostraron un incremento estadísticamente significativo (p<0.05) de IgG sérica en la segunda semana post-infección, con reconocimiento dirigido hacia proteínas con masas moleculares entre 63 y 71 kDa y puntos isoeléctricos entre 5.3 a 5.8. En el análisis por espectrometría de masas se identificaron tres proteínas variables de superficie (VSP-H7, VSP-H7-1 y VSP-INR) y una β-giardina. Adicionalmente se identificó la presencia de proteínas citoplasmáticas como la proteína 21.1, proteínas de choque térmico, proteína de unión a cadenas pesadas de inmunoglobulinas (BiP), enzimas como la fosfatidil inositol cinasa y enolasa en el área de inmunorreactividad. La generación de anticuerpos monoclonales (IgG2b) a partir de células de bazo de ratones infectados por vía per-oral con G. lamblia, permitió la identificación de proteínas inmunodominantes en la banda de 71 kDa. La presncia de agentes desnaturalizantes y reductores usados en la electroforesis en doble dimensión afectó el inmunorreconocimiento de IgA fecal. Los resultados de nuestro estudio sugieren que parte de la respuesta inmune humoral en ratones infectados con G. lamblia está dirigida contra epitopes conformacionales de proteínas localizadas en la superficie del parásito y proteínas citosólicas. El estudio de la respuesta inmune involucrada en la giardiasis, se ha abordado a través de la identificación y caracterización molecular de los antígenos de Giardia lamblia y en el estudio de los mecanismos de defensa contra el parásito. Sin embargo, solo relativamente pocas proteínas inmunogénicas se han caracterizado a nivel molecular. Estudios en humanos y en modelos murinos sugieren la participación importante de linfocitos T, linfocitos B ( Eckmann, 2003; Langford y cols., 2002; Rosales-Borjas y cols.,1998; Singer y col., 2000; Stäger y col., 1996) y ciertas citocinas (Biez, y cols., 2003; Venkatesan y cols., 1996; Zhou y cols., 2003; Zhou y cols. 2007) en el aclaramiento de la infección. Recientemente en nuestro laboratorio se identificaron una serie de bandas proteicas mediante SDS-PAGE, con capacidad de inducir una respuesta de anticuerpos IgA e IgG específicos hacia G. lamblia en ratones C3H/HeJ. En base a estos resultados y con el objetivo de profundizar más en el conocimiento de las proteínas inmunogénicas del parásito, se utilizó electroforesis en doble dimensión (2-DE) y análsis por espectrometría de masas. Los resultados de este estudio mostraron un incremento estadísticamente significativo (p<0.05) de IgG sérica en la segunda semana post-infección, con reconocimiento dirigido hacia proteínas con masas moleculares entre 63 y 71 kDa y puntos isoeléctricos entre 5.3 a 5.8. En el análisis por espectrometría de masas se identificaron tres proteínas variables de superficie (VSP-H7, VSP-H7-1 y VSP-INR) y una β-giardina. Adicionalmente se identificó la presencia de proteínas citoplasmáticas como la proteína 21.1, proteínas de choque térmico, proteína de unión a cadenas pesadas de inmunoglobulinas (BiP), enzimas como la fosfatidil inositol cinasa y enolasa en el área de inmunorreactividad. La generación de anticuerpos monoclonales (IgG2b) a partir de células de bazo de ratones infectados por vía per-oral con G. lamblia, permitió la identificación de proteínas inmunodominantes en la banda de 71 kDa. La presncia de agentes desnaturalizantes y reductores usados en la electroforesis en doble dimensión afectó el inmunorreconocimiento de IgA fecal. Los resultados de nuestro estudio sugieren que parte de la respuesta inmune humoral en ratones infectados con G. lamblia está dirigida contra epitopes conformacionales de proteínas localizadas en la superficie del parásito y proteínas citosólicas. El estudio de la respuesta inmune involucrada en la giardiasis, se ha abordado a través de la identificación y caracterización molecular de los antígenos de Giardia lamblia y en el estudio de los mecanismos de defensa contra el parásito. Sin embargo, solo relativamente pocas proteínas inmunogénicas se han caracterizado a nivel molecular. Estudios en humanos y en modelos murinos sugieren la participación importante de linfocitos T, linfocitos B ( Eckmann, 2003; Langford y cols., 2002; Rosales-Borjas y cols.,1998; Singer y col., 2000; Stäger y col., 1996) y ciertas citocinas (Biez, y cols., 2003; Venkatesan y cols., 1996; Zhou y cols., 2003; Zhou y cols. 2007) en el aclaramiento de la infección. Recientemente en nuestro laboratorio se identificaron una serie de bandas proteicas mediante SDS-PAGE, con capacidad de inducir una respuesta de anticuerpos IgA e IgG específicos hacia G. lamblia en ratones C3H/HeJ. En base a estos resultados y con el objetivo de profundizar más en el conocimiento de las proteínas inmunogénicas del parásito, se utilizó electroforesis en doble dimensión (2-DE) y análsis por espectrometría de masas. Los resultados de este estudio mostraron un incremento estadísticamente significativo (p<0.05) de IgG sérica en la segunda semana post-infección, con reconocimiento dirigido hacia proteínas con masas moleculares entre 63 y 71 kDa y puntos isoeléctricos entre 5.3 a 5.8. En el análisis por espectrometría de masas se identificaron tres proteínas variables de superficie (VSP-H7, VSP-H7-1 y VSP-INR) y una β-giardina. Adicionalmente se identificó la presencia de proteínas citoplasmáticas como la proteína 21.1, proteínas de choque térmico, proteína de unión a cadenas pesadas de inmunoglobulinas (BiP), enzimas como la fosfatidil inositol cinasa y enolasa en el área de inmunorreactividad. La generación de anticuerpos monoclonales (IgG2b) a partir de células de bazo de ratones infectados por vía per-oral con G. lamblia, permitió la identificación de proteínas inmunodominantes en la banda de 71 kDa. La presncia de agentes desnaturalizantes y reductores usados en la electroforesis en doble dimensión afectó el inmunorreconocimiento de IgA fecal. Los resultados de nuestro estudio sugieren que parte de la respuesta inmune humoral en ratones infectados con G. lamblia está dirigida contra epitopes conformacionales de proteínas localizadas en la superficie del parásito y proteínas citosólicas.